ការសិក្សានេះបង្ហាញថា ផ្សិតស៊ីមេទ្រី *Kosakonia oryziphila* NP19 ដែលញែកចេញពីឫសស្រូវ គឺជាថ្នាំសម្លាប់សត្វល្អិតជីវសាស្ត្រដែលជំរុញការលូតលាស់របស់រុក្ខជាតិ និងជាថ្នាំសម្លាប់សត្វល្អិតជីវសាស្ត្រដ៏ជោគជ័យមួយសម្រាប់ការគ្រប់គ្រងជំងឺប្លាស់ស្រូវដែលបង្កឡើងដោយ *Pyricularia oryzae*។ ការពិសោធន៍ក្នុងវីត្រូត្រូវបានធ្វើឡើងលើស្លឹកស្រស់ៗរបស់សំណាបស្រូវផ្កាម្លិះនៃពូជ Khao Dawk Mali 105 (KDML105)។ លទ្ធផលបានបង្ហាញថា NP19 បានរារាំងដំណុះនៃ conidia *Pyricularia oryzae* យ៉ាងមានប្រសិទ្ធភាព។ ការឆ្លងមេរោគ *Pyricularia oryzae* ត្រូវបានរារាំងក្រោមលក្ខខណ្ឌព្យាបាលបីផ្សេងគ្នា៖ ទីមួយ ស្រូវត្រូវបានដាក់អាណានិគមជាមួយ NP19 ហើយចាក់វ៉ាក់សាំង *Pyricularia oryzae* conidia; ទីពីរ ល្បាយនៃ NP19 និង *Pyricularia oryzae* conidia ត្រូវបានអនុវត្តទៅលើស្លឹក;
បាក់តេរីរ៉ៃហ្សូស្ហ្វែរ *Kosakonia oryziphila* NP1914ត្រូវបានញែកចេញពីឬសស្រូវ (*Oryza sativa* L. cv. RD6)។ *Kosakonia oryziphila* NP19 មានលក្ខណៈសម្បត្តិជំរុញការលូតលាស់របស់រុក្ខជាតិ រួមទាំងការជួសជុលអាសូត ការផលិតអាស៊ីត indoleacetic (IAA) និងការរំលាយផូស្វាត។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ *Kosakonia oryziphila* NP19 ផលិត chitinase១៤.ការប្រើប្រាស់ *Kosakonia oryziphila* NP19 ទៅលើគ្រាប់ពូជស្រូវ KDML105 បានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវអត្រារស់រានមានជីវិតរបស់ស្រូវបន្ទាប់ពីការឆ្លងមេរោគប្លាស់ស្រូវ។ គោលបំណងនៃការសិក្សានេះគឺដើម្បី (១) បញ្ជាក់ពីយន្តការរារាំងរបស់ *Kosakonia oryziphila* NP19 ប្រឆាំងនឹងជំងឺប្លាស់ស្រូវ និង (២) ស៊ើបអង្កេតពីឥទ្ធិពលរបស់ *Kosakonia oryziphila* NP19 ក្នុងការគ្រប់គ្រងជំងឺប្លាស់ស្រូវ។
សារធាតុចិញ្ចឹមដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការលូតលាស់ និងការអភិវឌ្ឍរបស់រុក្ខជាតិ ដោយបម្រើជាកត្តាដែលគ្រប់គ្រងជំងឺអតិសុខុមប្រាណផ្សេងៗ។ អាហារូបត្ថម្ភរ៉ែរបស់រុក្ខជាតិកំណត់ពីភាពធន់នឹងជំងឺ លក្ខណៈរូបវិទ្យា ឬជាលិកា និងភាពសាហាវ ឬសមត្ថភាពក្នុងការរស់រានមានជីវិតប្រឆាំងនឹងភ្នាក់ងារបង្កជំងឺ។ ផូស្វ័រអាចពន្យឺតការវិវត្ត និងកាត់បន្ថយភាពធ្ងន់ធ្ងរនៃជំងឺប្លាស់ស្រូវដោយបង្កើនការសំយោគសមាសធាតុហ្វេណុល។ ប៉ូតាស្យូមជាទូទៅកាត់បន្ថយអត្រាកើតជំងឺស្រូវជាច្រើន ដូចជាជំងឺប្លាស់ស្រូវ ជំងឺអុតស្លឹកបាក់តេរី ជំងឺអុតស្រទបស្លឹក ជំងឺរលួយដើម និងជំងឺអុតស្លឹក។ ការសិក្សាមួយដោយ Perrenoud បានបង្ហាញថា ជីប៉ូតាស្យូមខ្ពស់ក៏អាចកាត់បន្ថយអត្រាកើតជំងឺផ្សិតរបស់ស្រូវ និងបង្កើនទិន្នផលផងដែរ។ ការសិក្សាជាច្រើនបានបង្ហាញថា ជីស្ពាន់ធ័រអាចធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវភាពធន់នឹងដំណាំចំពោះភ្នាក់ងារបង្កជំងឺផ្សិត។27ម៉ាញ៉េស្យូមលើស (សមាសធាតុមួយនៃក្លរ៉ូហ្វីល) អាចនាំឱ្យមានជំងឺប្លាស់ស្រូវ។21ស័ង្កសីអាចសម្លាប់ភ្នាក់ងារបង្កជំងឺដោយផ្ទាល់ ដោយហេតុនេះកាត់បន្ថយភាពធ្ងន់ធ្ងរនៃជំងឺ។22ការសាកល្បងនៅទីវាលបានបង្ហាញថា ទោះបីជាកំហាប់ផូស្វ័រ ប៉ូតាស្យូម ស្ពាន់ធ័រ និងស័ង្កសីនៅក្នុងដីវាលខ្ពស់ជាងនៅក្នុងការពិសោធន៍ដាំក្នុងផើងក៏ដោយ ក៏ជំងឺប្លាស់ស្រូវនៅតែរីករាលដាលតាមរយៈស្លឹកស្រូវ។ សារធាតុចិញ្ចឹមក្នុងដីអាចមិនមានប្រសិទ្ធភាពខ្លាំងក្នុងការគ្រប់គ្រងជំងឺប្លាស់ស្រូវទេ ព្រោះសំណើម និងសីតុណ្ហភាពមិនអំណោយផលដល់ការរាតត្បាតខ្លាំងនៃភ្នាក់ងារបង្ករោគ។
នៅក្នុងការសាកល្បងនៅទីវាល បាក់តេរី Stenotrophomonas maltophilia, P. dispersa, Xanthomonas sacchari, Burkholderia multivorans, Burkholderia diffusa, Burkholderia vietnameniensis និង C. gleum ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងការព្យាបាលទាំងអស់។ Stenotrophomonas maltophilia ត្រូវបានញែកចេញពីរង្វិលនៃស្រូវសាលី ស្រូវសាលី ត្រសក់ ពោត និងដំឡូង ហើយបានបង្ហាញពីការគ្រប់គ្រងជីវសាស្រ្ត។សកម្មភាពប្រឆាំងនឹង Colletotrichum nymphaeae.28 លើសពីនេះ P. dispersa ត្រូវបានគេរាយការណ៍ថាមានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹងផ្សិតខ្មៅរលួយនៃដំឡូងជ្វា។29 លើសពីនេះ ពូជ R1 នៃ Xanthomonas sacchari បានបង្ហាញពីសកម្មភាពប្រឆាំងប្រឆាំងនឹងជំងឺប្លាស់ស្រូវ និងរលួយកួរដែលបង្កឡើងដោយ Burkholderiaគ្លូម៉ាអ៊ី.៣០ផ្សិត Burkholderia oryzae NP19 អាចបង្កើតទំនាក់ទំនងសហជីវិតជាមួយជាលិកាស្រូវក្នុងអំឡុងពេលដំណុះ ហើយក្លាយជាផ្សិតសហជីវិតសម្រាប់ពូជស្រូវមួយចំនួន។ ខណៈពេលដែលបាក់តេរីក្នុងដីផ្សេងទៀតអាចធ្វើអាណានិគមលើស្រូវបន្ទាប់ពីការស្ទូង ផ្សិតផ្ទុះ NP19 ដែលនៅពេលដែលធ្វើអាណានិគមរួច មានឥទ្ធិពលលើកត្តាជាច្រើននៅក្នុងយន្តការការពារស្រូវប្រឆាំងនឹងជំងឺនេះ។ NP19 មិនត្រឹមតែទប់ស្កាត់ការលូតលាស់របស់ P. oryzae ជាង 50% ប៉ុណ្ណោះទេ (សូមមើលតារាងបន្ថែម S1 នៅក្នុងឧបសម្ព័ន្ធអនឡាញ) ប៉ុន្តែវាក៏កាត់បន្ថយចំនួននៃដំបៅផ្ទុះលើស្លឹក និងបង្កើនទិន្នផលស្រូវដែលបានចាក់ ឬធ្វើអាណានិគមជាមួយ NP19 (RBf, RFf-B, និង RBFf-B) នៅក្នុងការសាកល្បងវាល (រូបភាព S3)។
ផ្សិត Pyricularia oryzae ដែលបណ្តាលឱ្យរុក្ខជាតិផ្ទុះ គឺជាផ្សិត hemittrophic ដែលត្រូវការសារធាតុចិញ្ចឹមពីរុក្ខជាតិម្ចាស់ផ្ទះអំឡុងពេលឆ្លងមេរោគ។ រុក្ខជាតិផលិតប្រភេទអុកស៊ីសែនដែលមានប្រតិកម្ម (ROS) ដើម្បីទប់ស្កាត់ការឆ្លងមេរោគផ្សិត។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ Pyricularia oryzae ប្រើយុទ្ធសាស្ត្រជាច្រើនដើម្បីទប់ទល់នឹង ROS ដែលផលិតដោយរុក្ខជាតិម្ចាស់ផ្ទះ។31ភេរ៉ុកស៊ីដាសហាក់ដូចជាដើរតួនាទីក្នុងភាពធន់នឹងភ្នាក់ងារបង្កជំងឺ រួមទាំងការភ្ជាប់គ្នានៃប្រូតេអ៊ីនជញ្ជាំងកោសិកា ការក្រាស់នៃជញ្ជាំងស៊ីឡឹម ការផលិត ROS និងការបន្សាបអ៊ីដ្រូសែនប៉េរ៉ុកស៊ីត។32អង់ស៊ីមប្រឆាំងអុកស៊ីតកម្មអាចបម្រើជាប្រព័ន្ធកម្ចាត់ ROS ជាក់លាក់មួយ។ តាមរយៈលក្ខណៈសម្បត្តិប្រឆាំងអុកស៊ីតកម្មរបស់វា ស៊ុយភើរអុកស៊ីដ ឌីស្មូតាស (SOD) និងពែរអុកស៊ីដាស (POD) ជួយផ្តួចផ្តើមការឆ្លើយតបការពារ ដោយ SOD បម្រើជាខ្សែការពារដំបូង។33នៅក្នុងស្រូវ សកម្មភាពអង់ស៊ីមប៉េរ៉ុកស៊ីដាសរបស់រុក្ខជាតិត្រូវបានបង្កឡើងបន្ទាប់ពីការឆ្លងមេរោគបង្កជំងឺរុក្ខជាតិដូចជា *Pyricularia oryzae* និង *Xanthomonas oryzae pv. Oryzae*។32នៅក្នុងការសិក្សានេះ សកម្មភាព peroxidase បានកើនឡើងនៅក្នុងស្រូវដែលដាំដុះ និង/ឬ ចាក់វ៉ាក់សាំងជាមួយ *Magnaporthe oryzae* NP19; ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ *Magnaporthe oryzae* មិនបានប៉ះពាល់ដល់សកម្មភាព peroxidase ទេ។ Superoxide dismutase (SOD) ដែលជា H₂O₂ synthase ជំរុញការកាត់បន្ថយ O₂⁻ ទៅជា H₂O₂។ SOD ដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងភាពធន់របស់រុក្ខជាតិចំពោះភាពតានតឹងផ្សេងៗ ដោយការធ្វើឱ្យមានតុល្យភាពកំហាប់ H₂O₂ នៅក្នុងរុក្ខជាតិ ដោយហេតុនេះបង្កើនភាពធន់របស់រុក្ខជាតិចំពោះភាពតានតឹងផ្សេងៗ។ នៅក្នុងការសិក្សានេះ នៅក្នុងការពិសោធន៍ដាំដំណាំ 30 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីការចាក់វ៉ាក់សាំង *Magnaporthe oryzae* (30 DAT) សកម្មភាព SOD នៅក្នុងក្រុម RF និង RBF គឺខ្ពស់ជាង 121.9% និង 104.5% ជាងក្រុម R រៀងៗខ្លួន ដែលបង្ហាញពីការឆ្លើយតបរបស់ SOD ចំពោះការឆ្លងមេរោគ *Magnaporthe oryzae*។ ទាំងនៅក្នុងការពិសោធន៍ដាំក្នុងផើង និងក្នុងស្រែ សកម្មភាព SOD នៅក្នុងអង្ករដែលបានទទួលការចម្លងមេរោគ *Magnaporthe oryzae* NP19 គឺខ្ពស់ជាង 67.7% និង 28.8% ធៀបនឹងអង្ករដែលមិនបានឆ្លងមេរោគ 30 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីការចម្លងមេរោគរៀងៗខ្លួន។ ការឆ្លើយតបជីវគីមីរបស់រុក្ខជាតិត្រូវបានប៉ះពាល់ដោយបរិស្ថាន ប្រភពស្ត្រេស និងប្រភេទរុក្ខជាតិ³⁵។ សកម្មភាពអង់ស៊ីមប្រឆាំងអុកស៊ីតកម្មរបស់រុក្ខជាតិត្រូវបានប៉ះពាល់ដោយផ្ទាល់ដោយកត្តាបរិស្ថាន ដែលវាប៉ះពាល់ដល់សកម្មភាពអង់ស៊ីមប្រឆាំងអុកស៊ីតកម្មរបស់រុក្ខជាតិដោយការផ្លាស់ប្តូរសហគមន៍អតិសុខុមប្រាណរបស់រុក្ខជាតិ។
ផ្សិតជំងឺប្លាស់ស្រូវ (Kosakonia oryziphila NP19, លេខចូលជាធរមាន NCBI PP861312) ដែលបានប្រើក្នុងការសិក្សានេះគឺជាពូជ13ញែកចេញពីឫសនៃពូជស្រូវ RD6 នៅក្នុងខេត្ត Nakhon Phanom ប្រទេសថៃ (16° 59′ 42.9″ N 104° 22′ 17.9″ E)។ ពូជនេះត្រូវបានដាំដុះក្នុងទឹកស៊ុបសារធាតុចិញ្ចឹម (NB) នៅសីតុណ្ហភាព 30°C និង 150 rpm រយៈពេល 18 ម៉ោង។ ដើម្បីគណនាកំហាប់បាក់តេរី ការស្រូបយកនៃសារធាតុព្យួរបាក់តេរីនៅ 600 nm ត្រូវបានវាស់វែង។ កំហាប់នៃសារធាតុព្យួរបាក់តេរីត្រូវបានកែតម្រូវទៅ១០⁶CFU/mL ជាមួយទឹកដែលគ្មានអ៊ីយ៉ុងសម្លាប់មេរោគ (dH₂O)។ ផ្សិតផ្ទុះស្រូវ (Pyricularia oryzae) ត្រូវបានចាក់ថ្នាំលើអាហ្គាដំឡូងបារាំង dextrose (PDA) ហើយភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 25°C រយៈពេល 7 ថ្ងៃ។ ផ្សិតមីសេលីញ៉ូមត្រូវបានផ្ទេរទៅក្នុងអាហ្គាកន្ទក់អង្ករ (កន្ទក់អង្ករ 2% (w/v) ស៊ុយក្រូស 0.5% (w/v) និងអាហ្គា 2% (w/v) រំលាយក្នុងទឹកដែលគ្មានអ៊ីយ៉ុង pH 7) ហើយភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 25°C រយៈពេល 7។ ស្លឹកស្រូវដែលងាយនឹងកើតជំងឺ (KDML105) ដែលបានសម្លាប់មេរោគត្រូវបានដាក់លើមីសេលីញ៉ូមដើម្បីបង្កជាកូនីឌៀ ហើយភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 25°C រយៈពេល 5 ថ្ងៃក្រោមពន្លឺ UV និងពន្លឺសរួមគ្នា។ កូនីឌៀត្រូវបានប្រមូលដោយជូតមីសេលីញ៉ូម និងផ្ទៃស្លឹកដែលឆ្លងមេរោគថ្នមៗជាមួយនឹងដំណោះស្រាយ Tween 20 កំហាប់ 0.025% (v/v) ចំនួន 10 មីលីលីត្រដែលបានសម្លាប់មេរោគ។ ដំណោះស្រាយផ្សិតត្រូវបានត្រងតាមរយៈក្រណាត់ស្តើងចំនួនប្រាំបីស្រទាប់ដើម្បីយកមីសេលីញ៉ូម អាហ្គា និងស្លឹកស្រូវចេញ។ កំហាប់កូនីឌៀនៅក្នុងទឹកស៊ីរ៉ូត្រូវបានកែតម្រូវទៅ 5 × 10⁵ កូនីឌៀ/មីលីលីត្រ សម្រាប់ការវិភាគបន្ថែម។
វប្បធម៌ស្រស់ៗនៃកោសិកា Kosakonia oryziphila NP19 ត្រូវបានរៀបចំដោយការដាំដុះក្នុងឧបករណ៍ផ្សព្វផ្សាយ NB នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 24 ម៉ោង។ បន្ទាប់ពីការបង្វិល (3047 × g, 10 នាទី) គ្រាប់កោសិកាត្រូវបានប្រមូល លាងសម្អាតពីរដងជាមួយអំបិលផូស្វាត 10 mM (PBS, pH 7.2) ហើយរលាយឡើងវិញក្នុងឧបករណ៍ផ្សព្វផ្សាយដូចគ្នា។ ដង់ស៊ីតេអុបទិកនៃស៊ុស្ប៉ង់ស្យុងកោសិកាត្រូវបានវាស់នៅ 600 nm ដោយទទួលបានតម្លៃប្រហែល 1.0 (ស្មើនឹង 1.0 × 10⁷ CFU/μl ដែលកំណត់ដោយការស្រោបលើចានអាហ្គាសារធាតុចិញ្ចឹម)។ កូនីឌៀរបស់ P. oryzae ត្រូវបានទទួលដោយការព្យួរពួកវានៅក្នុងដំណោះស្រាយ PBS ហើយរាប់វាដោយប្រើអេម៉ូស៊ីតូម៉ែត្រ។ ស៊ុស្ប៉ង់ស្យុងនៃ *K. oryziphila* NP19 និង *P។ ចំពោះការពិសោធន៍លាបស្លឹក មេរោគ K. oryziphila* conidia ត្រូវបានរៀបចំលើស្លឹកស្រូវស្រស់ៗក្នុងកំហាប់ 1.0 × 10⁷ CFU/μL និង 5.0 × 10² conidia/μL រៀងៗខ្លួន។ វិធីសាស្ត្ររៀបចំគំរូស្រូវមានដូចខាងក្រោម៖ ស្លឹកស្រូវប្រវែង 5 សង់ទីម៉ែត្រត្រូវបានកាត់ចេញ ហើយដាក់ក្នុងចាន Petri ដែលមានក្រដាសស្រូបយកសំណើម។ ក្រុមព្យាបាលចំនួនប្រាំត្រូវបានបង្កើតឡើង៖ (i) R: ស្លឹកស្រូវដោយមិនមានការចម្លងបាក់តេរីជាក្រុមត្រួតពិនិត្យ បន្ថែមដោយដំណោះស្រាយ Tween 20 កំហាប់ 0.025% (v/v); (ii) RB + F: អង្ករដែលចម្លងជាមួយ K. oryziphila NP19 បន្ថែមដោយស៊ុស្ប៉ង់ស្យុង conidia ចំនួន 2 μL នៃផ្សិតដែលបណ្តាលឱ្យកើតជំងឺប្លាស់ស្រូវ; (iii) R + BF: អង្ករក្នុងក្រុម R ដែលចម្លងជាមួយល្បាយស៊ុស្ប៉ង់ស្យុង conidia ផ្សិតប្លាស់ និង K. oryziphila NP19 ចំនួន 4 μl (សមាមាត្របរិមាណ 1:1); (iv) R + F៖ អង្ករនៅក្នុងក្រុម R ដែលបានបន្ថែមជាមួយនឹងទឹកស៊ីរ៉ូផ្សិតខនីឌៀចំនួន 2 μl; (v) RF + B៖ អង្ករនៅក្នុងក្រុម R ដែលបានបន្ថែមជាមួយនឹងទឹកស៊ីរ៉ូផ្សិតខនីឌៀចំនួន 2 μl ត្រូវបានភ្ញាស់រយៈពេល 30 ម៉ោង ហើយបន្ទាប់មកទឹកស៊ីរ៉ូ K. oryziphila NP19 ចំនួន 2 μl ត្រូវបានបន្ថែមនៅកន្លែងដដែល។ ចាន Petri ទាំងអស់ត្រូវបានភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 25°C ក្នុងទីងងឹតរយៈពេល 30 ម៉ោង ហើយបន្ទាប់មកដាក់ក្រោមពន្លឺជាបន្តបន្ទាប់។ ក្រុមនីមួយៗត្រូវបានបង្កើតឡើងជាបីផ្នែក។ បន្ទាប់ពីដាំដុះរយៈពេល 72 ម៉ោង ជាលិការុក្ខជាតិត្រូវបានសង្កេតឃើញ និងវិភាគដោយមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេន (SEM)។ ជាសង្ខេប ជាលិការុក្ខជាតិត្រូវបានជួសជុលនៅក្នុងសារធាតុ phosphate buffer ដែលមាន glutaraldehyde 2.5% (v/v) ហើយត្រូវបានខ្សោះជាតិទឹកតាមរយៈដំណោះស្រាយអេតាណុលជាបន្តបន្ទាប់។ បន្ទាប់ពីការសម្ងួតចំណុចសំខាន់ជាមួយកាបូនឌីអុកស៊ីត គំរូត្រូវបានស្រោបដោយមាស ហើយចុងក្រោយត្រូវបានពិនិត្យដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេន។15
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី ១៥ ខែធ្នូ ឆ្នាំ ២០២៥