នៅក្នុងការសិក្សានេះ ផលប៉ះពាល់ជំរុញនៃការព្យាបាលរួមគ្នានៃសារធាតុគ្រប់គ្រងការលូតលាស់រុក្ខជាតិ(2,4-D និង kinetin) និងភាគល្អិតណាណូអុកស៊ីដជាតិដែក (Fe₃O₄-NPs) លើការបង្កើតរូបរាងក្នុងវីត្រូ និងការផលិតសារធាតុរំលាយអាហារបន្ទាប់បន្សំនៅក្នុង *Hypericum perforatum* L. ត្រូវបានស៊ើបអង្កេត។ ការព្យាបាលដែលមានប្រសិទ្ធភាពបំផុត [2,4-D (0.5 mg/L) + kinetin (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] បានធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវប៉ារ៉ាម៉ែត្រលូតលាស់របស់រុក្ខជាតិយ៉ាងខ្លាំង៖ កម្ពស់រុក្ខជាតិកើនឡើង 59.6% ប្រវែងឫសកើនឡើង 114.0% ចំនួនពន្លកកើនឡើង 180.0% និងទម្ងន់ដើមស្រស់កើនឡើង 198.3% បើប្រៀបធៀបជាមួយក្រុមត្រួតពិនិត្យ។ ការព្យាបាលរួមគ្នានេះក៏បានបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃការបង្កើតឡើងវិញ (50.85%) និងបង្កើនមាតិកា hypericin 66.6%។ ការវិភាគ GC-MS បានបង្ហាញពីមាតិកាខ្ពស់នៃ hyperoside, β-patholene និង cetyl alcohol ដែលមានចំនួន 93.36% នៃផ្ទៃកំពូលសរុប ខណៈពេលដែលមាតិកានៃ phenolic និង flavonoids សរុបបានកើនឡើងរហូតដល់ 80.1%។ លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា សារធាតុនិយតករកំណើនរុក្ខជាតិ (PGRs) និងភាគល្អិតណាណូ Fe₃O₄ (Fe₃O₄-NPs) បញ្ចេញឥទ្ធិពលសហការគ្នាដោយការជំរុញ organogenesis និងការប្រមូលផ្តុំសមាសធាតុជីវសកម្ម ដែលតំណាងឱ្យយុទ្ធសាស្ត្រដ៏ជោគជ័យសម្រាប់ការកែលម្អជីវបច្ចេកវិទ្យានៃរុក្ខជាតិឱសថ។
ស្មៅ St. John (Hypericum perforatum L.) ដែលត្រូវបានគេស្គាល់ផងដែរថាជាស្មៅ St. John គឺជារុក្ខជាតិស្មៅដែលមានអាយុច្រើនឆ្នាំនៃគ្រួសារ Hypericaceae ដែលមានតម្លៃសេដ្ឋកិច្ច។[1] សមាសធាតុជីវសកម្មដែលមានសក្តានុពលរបស់វារួមមាន តានីនធម្មជាតិ សាន់ថូន ហ្វ្លូរ៉ូគ្លូស៊ីណុល ណាហ្វថាលេណេឌីអានត្រូន (ហៃពែរីន និង ស៊ុយដូអ៊ីពែរីន) ហ្វ្លាវ៉ូណូអ៊ីបឺរ អាស៊ីតហ្វេណុល និងប្រេងសំខាន់ៗ។[2,3,4] ស្មៅ St. John អាចត្រូវបានបន្តពូជដោយវិធីសាស្ត្រប្រពៃណី។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ រដូវកាលនៃវិធីសាស្ត្រប្រពៃណី ដំណុះគ្រាប់ពូជទាប និងភាពងាយនឹងកើតជំងឺកំណត់សក្តានុពលរបស់វាសម្រាប់ការដាំដុះទ្រង់ទ្រាយធំ និងការបង្កើតជាបន្តបន្ទាប់នៃសារធាតុរំលាយអាហារបន្ទាប់បន្សំ។[1,5,6]
ដូច្នេះ ការដាំដុះជាលិកាក្នុងវីត្រូ ត្រូវបានចាត់ទុកថាជាវិធីសាស្ត្រដ៏មានប្រសិទ្ធភាពមួយសម្រាប់ការបន្តពូជរុក្ខជាតិយ៉ាងឆាប់រហ័ស ការអភិរក្សធនធានជីវសាស្ត្រ និងការបង្កើនទិន្នផលនៃសមាសធាតុឱសថ [7, 8]។ សារធាតុនិយតករកំណើនរុក្ខជាតិ (PGRs) ដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការគ្រប់គ្រង morphogenesis ហើយវាចាំបាច់សម្រាប់ការដាំដុះ callus និងសារពាង្គកាយទាំងមូលក្នុងវីត្រូ។ ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃកំហាប់ និងការរួមបញ្ចូលគ្នារបស់ពួកវាគឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការបញ្ចប់ដំណើរការអភិវឌ្ឍន៍ទាំងនេះដោយជោគជ័យ [9]។ ដូច្នេះ ការយល់ដឹងអំពីសមាសភាព និងកំហាប់សមស្របនៃសារធាតុនិយតករគឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការកែលម្អការលូតលាស់ និងសមត្ថភាពបង្កើតឡើងវិញនៃស្មៅ St. John's wort (H. perforatum) [10]។
ភាគល្អិតណាណូអុកស៊ីដជាតិដែក (Fe₃O₄) គឺជាថ្នាក់នៃភាគល្អិតណាណូដែលត្រូវបាន ឬកំពុងត្រូវបានបង្កើតឡើងសម្រាប់ការដាំដុះជាលិកា។ Fe₃O₄ មានលក្ខណៈសម្បត្តិម៉ាញេទិកសំខាន់ៗ ភាពឆបគ្នាជីវសាស្រ្តល្អ និងសមត្ថភាពក្នុងការជំរុញការលូតលាស់របស់រុក្ខជាតិ និងកាត់បន្ថយភាពតានតឹងបរិស្ថាន ដូច្នេះវាបានទាក់ទាញការចាប់អារម្មណ៍យ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងការរចនាការដាំដុះជាលិកា។ ការអនុវត្តសក្តានុពលនៃភាគល្អិតណាណូទាំងនេះអាចរួមបញ្ចូលការធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវការដាំដុះក្នុងវីត្រូ ដើម្បីលើកកម្ពស់ការបែងចែកកោសិកា ធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវការស្រូបយកសារធាតុចិញ្ចឹម និងធ្វើឱ្យអង់ស៊ីមប្រឆាំងអុកស៊ីតកម្មសកម្ម [11]។
ទោះបីជាភាគល្អិតណាណូបានបង្ហាញពីប្រសិទ្ធភាពជំរុញល្អលើការលូតលាស់របស់រុក្ខជាតិក៏ដោយ ការសិក្សាលើការអនុវត្តរួមគ្នានៃភាគល្អិតណាណូ Fe₃O₄ និងសារធាតុគ្រប់គ្រងការលូតលាស់រុក្ខជាតិដែលប្រសើរឡើងនៅក្នុង *H. perforatum* នៅតែមានកម្រិត។ ដើម្បីបំពេញចន្លោះប្រហោងចំណេះដឹងនេះ ការសិក្សានេះបានវាយតម្លៃពីផលប៉ះពាល់នៃឥទ្ធិពលរួមបញ្ចូលគ្នារបស់វាទៅលើ morphogenesis ក្នុង vitro និងការផលិតសារធាតុរំលាយអាហារបន្ទាប់បន្សំ ដើម្បីផ្តល់នូវការយល់ដឹងថ្មីសម្រាប់ការកែលម្អលក្ខណៈនៃរុក្ខជាតិឱសថ។ ដូច្នេះ ការសិក្សានេះមានគោលបំណងពីរ៖ (1) បង្កើនប្រសិទ្ធភាពកំហាប់នៃសារធាតុគ្រប់គ្រងការលូតលាស់រុក្ខជាតិ ដើម្បីលើកកម្ពស់ការបង្កើត callus ការបង្កើតពន្លកឡើងវិញ និងការចាក់ឬសនៅក្នុង vitro ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព; និង (2) វាយតម្លៃផលប៉ះពាល់នៃភាគល្អិតណាណូ Fe₃O₄ លើប៉ារ៉ាម៉ែត្រលូតលាស់នៅក្នុង vitro។ ផែនការនាពេលអនាគតរួមមានការវាយតម្លៃអត្រារស់រានមានជីវិតរបស់រុក្ខជាតិដែលបានបង្កើតឡើងវិញក្នុងអំឡុងពេលសម្របខ្លួន (នៅក្នុង vitro)។ គេរំពឹងថាលទ្ធផលនៃការសិក្សានេះនឹងធ្វើអោយប្រសើរឡើងយ៉ាងខ្លាំងនូវប្រសិទ្ធភាពនៃការសាយភាយមីក្រូនៃ *H. perforatum* ដោយហេតុនេះរួមចំណែកដល់ការប្រើប្រាស់ប្រកបដោយចីរភាព និងការអនុវត្តជីវបច្ចេកវិទ្យានៃរុក្ខជាតិឱសថដ៏សំខាន់នេះ។
នៅក្នុងការសិក្សានេះ យើងបានទទួលស្លឹករុក្ខជាតិពីរុក្ខជាតិ St. John's wort ប្រចាំឆ្នាំដែលដាំដុះនៅវាលស្រែ (រុក្ខជាតិមេ)។ ស្លឹករុក្ខជាតិទាំងនេះត្រូវបានប្រើដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ក្នុងវីត្រូ។ មុនពេលដាំដុះ ស្លឹកត្រូវបានលាងសម្អាតយ៉ាងហ្មត់ចត់នៅក្រោមទឹកចម្រោះដែលកំពុងហូររយៈពេលជាច្រើននាទី។ បន្ទាប់មកផ្ទៃរុក្ខជាតិត្រូវបានសម្លាប់មេរោគដោយការជ្រលក់ក្នុងអេតាណុល 70% រយៈពេល 30 វិនាទី បន្ទាប់មកជ្រលក់ក្នុងដំណោះស្រាយសូដ្យូមអ៊ីប៉ូក្លរីត (NaOCl) 1.5% ដែលមានផ្ទុក Tween 20 ពីរបីដំណក់រយៈពេល 10 នាទី។ ជាចុងក្រោយ រុក្ខជាតិដែលត្រូវបានជ្រលក់ត្រូវបានលាងសម្អាតបីដងជាមួយទឹកចម្រោះមាប់មគមុនពេលផ្ទេរទៅឧបករណ៍វប្បធម៌បន្ទាប់។
ក្នុងរយៈពេលបួនសប្តាហ៍បន្ទាប់ ប៉ារ៉ាម៉ែត្រនៃការបង្កើតពន្លកឡើងវិញត្រូវបានវាស់វែង រួមទាំងអត្រានៃការបង្កើតឡើងវិញ ចំនួនពន្លកក្នុងមួយដើមដែលបានដាំឡើងវិញ និងប្រវែងពន្លក។ នៅពេលដែលពន្លកដែលដាំឡើងវិញមានប្រវែងយ៉ាងហោចណាស់ 2 សង់ទីម៉ែត្រ ពួកវាត្រូវបានផ្ទេរទៅឧបករណ៍ដាំឬសដែលមានឧបករណ៍ដាំឬសដែលមានឧបករណ៍ដាំឬសពាក់កណ្តាលកម្លាំង អាស៊ីតអ៊ីនដូលប៊ូទីរីក (IBA) 0.5 មីលីក្រាម/លីត្រ និងជ័រហ្គារ 0.3%។ ការដាំដុះឬសបានបន្តរយៈពេលបីសប្តាហ៍ ក្នុងអំឡុងពេលនោះអត្រានៃការលូតលាស់ឬស ចំនួនឫស និងប្រវែងឫសត្រូវបានវាស់វែង។ ការព្យាបាលនីមួយៗត្រូវបានធ្វើម្តងទៀតបីដង ដោយមានរុក្ខជាតិដាំឬសចំនួន 10 ត្រូវបានដាំដុះក្នុងមួយការចម្លង ដែលផ្តល់ទិន្នផលប្រហែល 30 ដើមក្នុងមួយការព្យាបាល។
កម្ពស់រុក្ខជាតិត្រូវបានវាស់ជាសង់ទីម៉ែត្រ (សង់ទីម៉ែត្រ) ដោយប្រើបន្ទាត់ ពីគល់រុក្ខជាតិរហូតដល់ចុងស្លឹកខ្ពស់បំផុត។ ប្រវែងឫសត្រូវបានវាស់ជាមីលីម៉ែត្រ (ម.ម.) ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីដកសំណាបចេញដោយប្រុងប្រយ័ត្ន និងដកឧបករណ៍ដាំដុះចេញ។ ចំនួនពន្លកក្នុងមួយដើមដែលត្រូវបានដាំត្រូវបានរាប់ដោយផ្ទាល់លើរុក្ខជាតិនីមួយៗ។ ចំនួនចំណុចខ្មៅនៅលើស្លឹក ដែលគេស្គាល់ថាជាដុំពក ត្រូវបានវាស់ដោយមើលឃើញ។ ដុំពកខ្មៅទាំងនេះត្រូវបានគេជឿថាជាក្រពេញដែលមានផ្ទុកអ៊ីពែរស៊ីស៊ីន ឬចំណុចអុកស៊ីតកម្ម ហើយត្រូវបានគេប្រើជាសូចនាករសរីរវិទ្យានៃការឆ្លើយតបរបស់រុក្ខជាតិចំពោះការព្យាបាល។ បន្ទាប់ពីដកឧបករណ៍ដាំដុះទាំងអស់ចេញ ទម្ងន់ស្រស់របស់សំណាបត្រូវបានវាស់ដោយប្រើមាត្រដ្ឋានអេឡិចត្រូនិចដែលមានភាពត្រឹមត្រូវជាមីលីក្រាម (មីលីក្រាម)។
វិធីសាស្ត្រសម្រាប់គណនាអត្រានៃការបង្កើតកាលុសមានដូចខាងក្រោម៖ បន្ទាប់ពីដាំដុះរុក្ខជាតិដែលដុះពន្លកក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកដែលមានសារធាតុកំណត់ការលូតលាស់ផ្សេងៗ (គីណាស 2,4-D និង Fe3O4) រយៈពេលបួនសប្តាហ៍ ចំនួនរុក្ខជាតិដែលមានសមត្ថភាពបង្កើតកាលុសត្រូវបានរាប់។ រូបមន្តសម្រាប់គណនាអត្រានៃការបង្កើតកាលុសមានដូចខាងក្រោម៖
ការព្យាបាលនីមួយៗត្រូវបានធ្វើម្តងទៀតបីដង ដោយមានការពិនិត្យយ៉ាងហោចណាស់ 10 ចំណុចនៅក្នុងការធ្វើម្តងទៀតនីមួយៗ។
អត្រានៃការបង្កើតឡើងវិញឆ្លុះបញ្ចាំងពីសមាមាត្រនៃជាលិកាកាលុសដែលបញ្ចប់ដំណើរការខុសគ្នានៃពន្លកដោយជោគជ័យបន្ទាប់ពីដំណាក់កាលបង្កើតកាលុស។ សូចនាករនេះបង្ហាញពីសមត្ថភាពនៃជាលិកាកាលុសក្នុងការប្រែក្លាយទៅជាជាលិកាខុសគ្នា និងលូតលាស់ទៅជាសរីរាង្គរុក្ខជាតិថ្មី។
មេគុណប្ញសគឺជាសមាមាត្រនៃចំនួនមែកដែលអាចប្ញសបានទៅនឹងចំនួនមែកសរុប។ សូចនាករនេះឆ្លុះបញ្ចាំងពីភាពជោគជ័យនៃដំណាក់កាលប្ញស ដែលមានសារៈសំខាន់ក្នុងការពង្រីកប្រព័ន្ធមីក្រូ និងការពង្រីករុក្ខជាតិ ព្រោះប្ញសល្អជួយឱ្យសំណាបរស់រានមានជីវិតបានល្អក្នុងលក្ខខណ្ឌលូតលាស់។
សមាសធាតុ Hypericin ត្រូវបានស្រង់ចេញជាមួយមេតាណុល 90%។ សម្ភារៈរុក្ខជាតិស្ងួតចំនួន 50 មីលីក្រាមត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងមេតាណុល 1 មីលីលីត្រ ហើយត្រូវបានបញ្ចេញសំឡេងរយៈពេល 20 នាទី ក្នុងប្រេកង់ 30 kHz ក្នុងម៉ាស៊ីនសម្អាត ultrasonic (ម៉ូដែល A5120-3YJ) នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ក្នុងទីងងឹត។ បន្ទាប់ពីការបញ្ចេញសំឡេង គំរូត្រូវបានបង្វិលក្នុងល្បឿន 6000 rpm រយៈពេល 15 នាទី។ សារធាតុរាវខាងលើត្រូវបានប្រមូល ហើយការស្រូបយករបស់ hypericin ត្រូវបានវាស់នៅ 592 nm ដោយប្រើ spectrophotometer Plus-3000 S ស្របតាមវិធីសាស្ត្រដែលបានពិពណ៌នាដោយ Conceiçao et al. [14]។
ការព្យាបាលភាគច្រើនជាមួយនឹងសារធាតុគ្រប់គ្រងការលូតលាស់រុក្ខជាតិ (PGRs) និងភាគល្អិតណាណូអុកស៊ីដជាតិដែក (Fe₃O₄-NPs) មិនបានបង្កឱ្យមានការបង្កើតដុំខ្មៅនៅលើស្លឹកពន្លកដែលដុះឡើងវិញនោះទេ។ មិនមានដុំណាមួយត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងការព្យាបាលណាមួយជាមួយនឹង 2,4-D 0.5 ឬ 1 មីលីក្រាម/លីត្រ, kinetin 0.5 ឬ 1 មីលីក្រាម/លីត្រ ឬភាគល្អិតណាណូអុកស៊ីដជាតិដែក 1, 2 ឬ 4 មីលីក្រាម/លីត្រនោះទេ។ ការរួមបញ្ចូលគ្នាមួយចំនួនបានបង្ហាញពីការកើនឡើងបន្តិចបន្តួចនៃការវិវត្តនៃដុំ (ប៉ុន្តែមិនមានសារៈសំខាន់ខាងស្ថិតិទេ) នៅកំហាប់ខ្ពស់នៃ kinetin និង/ឬភាគល្អិតណាណូអុកស៊ីដជាតិដែក ដូចជាការរួមបញ្ចូលគ្នានៃ 2,4-D (0.5–2 មីលីក្រាម/លីត្រ) ជាមួយ kinetin (1–1.5 មីលីក្រាម/លីត្រ) និងភាគល្អិតណាណូអុកស៊ីដជាតិដែក (2–4 មីលីក្រាម/លីត្រ)។ លទ្ធផលទាំងនេះត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 2។ ដុំខ្មៅតំណាងឱ្យក្រពេញសម្បូរ hypericin ទាំងកើតឡើងដោយធម្មជាតិ និងមានប្រយោជន៍។ នៅក្នុងការសិក្សានេះ ដុំពកខ្មៅភាគច្រើនត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការឡើងពណ៌ត្នោតនៃជាលិកា ដែលបង្ហាញពីបរិយាកាសអំណោយផលសម្រាប់ការប្រមូលផ្តុំអ៊ីពែរស៊ីន។ ការព្យាបាលដោយប្រើណាណូភាគល្អិត 2,4-D, kinetin និង Fe₃O₄ បានជំរុញការលូតលាស់នៃស្នាមអុចខ្មៅ ការថយចុះនៃការឡើងពណ៌ត្នោត និងការកើនឡើងនៃមាតិកាក្លរ៉ូហ្វីល ដែលបង្ហាញពីមុខងារមេតាបូលីសប្រសើរឡើង និងការថយចុះសក្តានុពលនៃការខូចខាតអុកស៊ីតកម្ម [37]។ ការសិក្សានេះបានវាយតម្លៃពីផលប៉ះពាល់នៃ kinetin រួមផ្សំជាមួយណាណូភាគល្អិត 2,4-D និង Fe₃O₄ លើការលូតលាស់ និងការអភិវឌ្ឍនៃស្នាមអុចខ្មៅ St. John's wort (រូបភាពទី 3a–g)។ ការសិក្សាពីមុនបានបង្ហាញថា ភាគល្អិតណាណូ Fe₃O₄ មានសកម្មភាពប្រឆាំងនឹងផ្សិត និងប្រឆាំងមេរោគ [38, 39] ហើយនៅពេលប្រើរួមផ្សំជាមួយនឹងនិយតករលូតលាស់រុក្ខជាតិ អាចជំរុញយន្តការការពាររុក្ខជាតិ និងកាត់បន្ថយសន្ទស្សន៍ស្ត្រេសកោសិកា [18]។ ទោះបីជាជីវសំយោគនៃសារធាតុរំលាយអាហារបន្ទាប់បន្សំត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយហ្សែនក៏ដោយ ទិន្នផលជាក់ស្តែងរបស់វាអាស្រ័យយ៉ាងខ្លាំងទៅលើលក្ខខណ្ឌបរិស្ថាន។ ការផ្លាស់ប្តូរមេតាបូលីស និងរូបវិទ្យាអាចមានឥទ្ធិពលលើកម្រិតសារធាតុរំលាយអាហារបន្ទាប់បន្សំដោយការគ្រប់គ្រងការបញ្ចេញមតិនៃហ្សែនរុក្ខជាតិជាក់លាក់ និងឆ្លើយតបទៅនឹងកត្តាបរិស្ថាន។ លើសពីនេះ សារធាតុជំរុញអាចបង្កឱ្យមានការធ្វើឱ្យសកម្មនៃហ្សែនថ្មី ដែលវាជំរុញសកម្មភាពអង់ស៊ីម ដែលនៅទីបំផុតធ្វើឱ្យសកម្មផ្លូវជីវសំយោគច្រើន និងនាំទៅរកការបង្កើតសារធាតុរំលាយបន្ទាប់បន្សំ។ លើសពីនេះ ការសិក្សាមួយផ្សេងទៀតបានបង្ហាញថា ការកាត់បន្ថយការដាក់ស្រមោលបង្កើនការប៉ះពាល់នឹងពន្លឺព្រះអាទិត្យ ដោយហេតុនេះបង្កើនសីតុណ្ហភាពពេលថ្ងៃនៅក្នុងជម្រកធម្មជាតិរបស់ *Hypericum perforatum* ដែលក៏រួមចំណែកដល់ការកើនឡើងនៃទិន្នផល hypericin ផងដែរ។ ដោយផ្អែកលើទិន្នន័យទាំងនេះ ការសិក្សានេះបានស៊ើបអង្កេតតួនាទីរបស់ភាគល្អិតណាណូជាតិដែកជាសារធាតុជំរុញសក្តានុពលក្នុងការដាំដុះជាលិកា។ លទ្ធផលបានបង្ហាញថា ភាគល្អិតណាណូទាំងនេះអាចធ្វើឱ្យហ្សែនដែលពាក់ព័ន្ធនឹងជីវសំយោគ hesperidin សកម្មតាមរយៈការរំញោចអង់ស៊ីម ដែលនាំឱ្យមានការប្រមូលផ្តុំសមាសធាតុនេះកើនឡើង (រូបភាពទី 2)។ ដូច្នេះ បើប្រៀបធៀបទៅនឹងរុក្ខជាតិដែលដុះលូតលាស់ក្រោមលក្ខខណ្ឌធម្មជាតិ វាអាចត្រូវបានអះអាងថា ការផលិតសមាសធាតុបែបនេះនៅក្នុង vivo ក៏អាចត្រូវបានបង្កើនផងដែរ នៅពេលដែលភាពតានតឹងកម្រិតមធ្យមត្រូវបានផ្សំជាមួយនឹងការធ្វើឱ្យសកម្មនៃហ្សែនដែលពាក់ព័ន្ធនឹងជីវសំយោគនៃសារធាតុរំលាយបន្ទាប់បន្សំ។ ការព្យាបាលរួមបញ្ចូលគ្នាជាទូទៅមានឥទ្ធិពលវិជ្ជមានទៅលើអត្រានៃការបង្កើតឡើងវិញ ប៉ុន្តែក្នុងករណីខ្លះ ឥទ្ធិពលនេះត្រូវបានចុះខ្សោយ។ ជាពិសេស ការព្យាបាលដោយប្រើ 2,4-D ក្នុងកំហាប់ 1 mg/L, kinase 1.5 mg/L និងកំហាប់ផ្សេងៗគ្នាអាចបង្កើនអត្រាបង្កើតឡើងវិញដោយឯករាជ្យ និងគួរឱ្យកត់សម្គាល់ចំនួន 50.85% បើប្រៀបធៀបទៅនឹងក្រុមត្រួតពិនិត្យ (រូបភាពទី 4c)។ លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា ការរួមបញ្ចូលគ្នាជាក់លាក់នៃណាណូអរម៉ូនអាចធ្វើសកម្មភាពរួមគ្នាដើម្បីជំរុញការលូតលាស់របស់រុក្ខជាតិ និងការផលិតមេតាបូលីត ដែលមានសារៈសំខាន់យ៉ាងខ្លាំងសម្រាប់ការដាំដុះជាលិកានៃរុក្ខជាតិឱសថ។ Palmer និង Keller [50] បានបង្ហាញថា ការព្យាបាលដោយប្រើ 2,4-D អាចបង្កឱ្យមានការបង្កើត callus ដោយឯករាជ្យនៅក្នុង St. perforatum ខណៈពេលដែលការបន្ថែម kinase បានបង្កើនការបង្កើត callus និងការបង្កើតឡើងវិញយ៉ាងសំខាន់។ ឥទ្ធិពលនេះគឺដោយសារតែការកែលម្អតុល្យភាពអ័រម៉ូន និងការជំរុញការបែងចែកកោសិកា។ Bal et al. [51] បានរកឃើញថា ការព្យាបាលដោយ Fe₃O₄-NP អាចបង្កើនមុខងាររបស់អង់ស៊ីមប្រឆាំងអុកស៊ីតកម្មដោយឯករាជ្យ ដោយហេតុនេះជំរុញការលូតលាស់ឫសនៅក្នុង St. perforatum។ ឧបករណ៍ផ្សព្វផ្សាយវប្បធម៌ដែលមានភាគល្អិត Fe₃O₄ ក្នុងកំហាប់ 0.5 mg/L, 1 mg/L និង 1.5 mg/L បានធ្វើឱ្យអត្រានៃការបង្កើតឡើងវិញនៃរុក្ខជាតិ flax [52]។ ការប្រើប្រាស់ភាគល្អិត kinetin, 2,4-dichlorobenzothiazolinone និង Fe₃O₄ បានធ្វើឱ្យអត្រានៃការបង្កើតឡើងវិញនៃស្បែក និងឫសមានភាពប្រសើរឡើងយ៉ាងខ្លាំង ប៉ុន្តែផលប៉ះពាល់ដែលអាចកើតមាននៃការប្រើអរម៉ូនទាំងនេះសម្រាប់ការបង្កើតឡើងវិញក្នុងវីត្រូត្រូវតែពិចារណា។ ឧទាហរណ៍ ការប្រើប្រាស់រយៈពេលយូរ ឬកំហាប់ខ្ពស់នៃ 2,4-dichlorobenzothiazolinone ឬ kinetin អាចបណ្តាលឱ្យមានការប្រែប្រួលក្លូនសូម៉ាទិច ស្ត្រេសអុកស៊ីតកម្ម រូបរាងស្បែកមិនប្រក្រតី ឬការធ្វើកញ្ចក់។ ដូច្នេះ ការបង្កើតឡើងវិញខ្ពស់មិនចាំបាច់ព្យាករណ៍ពីស្ថេរភាពហ្សែនទេ។ រុក្ខជាតិដែលបង្កើតឡើងវិញទាំងអស់គួរតែត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើសញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុល (ឧទាហរណ៍ RAPD, ISSR, AFLP) ឬការវិភាគស៊ីតូហ្សែនទិក ដើម្បីកំណត់ភាពដូចគ្នា និងភាពស្រដៀងគ្នារបស់វាទៅនឹងរុក្ខជាតិក្នុងវីវ៉ូ [53,54,55]។
ការសិក្សានេះបានបង្ហាញជាលើកដំបូងថា ការប្រើប្រាស់រួមគ្នានៃសារធាតុគ្រប់គ្រងការលូតលាស់រុក្ខជាតិ (2,4-D និង kinetin) ជាមួយភាគល្អិតណាណូ Fe₃O₄ អាចបង្កើន morphogenesis និងការប្រមូលផ្តុំនៃសារធាតុរំលាយអាហារជីវសកម្មសំខាន់ៗ (រួមទាំង hypericin និង hyperoside) នៅក្នុង *Hypericum perforatum*។ របបព្យាបាលដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង (1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin + 4 mg/L Fe₃O₄-NPs) មិនត្រឹមតែបង្កើនការបង្កើត callus ការបង្កើតសរីរាង្គ និងទិន្នផលសារធាតុរំលាយអាហារបន្ទាប់បន្សំប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែថែមទាំងបានបង្ហាញពីប្រសិទ្ធភាពបង្កើតស្រាល ដែលអាចធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវការអត់ធ្មត់ស្ត្រេសរបស់រុក្ខជាតិ និងតម្លៃឱសថ។ ការរួមបញ្ចូលគ្នានៃបច្ចេកវិទ្យាណាណូ និងការដាំដុះជាលិការុក្ខជាតិផ្តល់នូវវេទិកាប្រកបដោយនិរន្តរភាព និងប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់ការផលិតសមាសធាតុឱសថក្នុងវីត្រូទ្រង់ទ្រាយធំ។ លទ្ធផលទាំងនេះបើកផ្លូវសម្រាប់កម្មវិធីឧស្សាហកម្ម និងការស្រាវជ្រាវនាពេលអនាគតទៅលើយន្តការម៉ូលេគុល ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាពកម្រិតថ្នាំ និងភាពជាក់លាក់ខាងហ្សែន ដោយហេតុនេះភ្ជាប់ការស្រាវជ្រាវជាមូលដ្ឋានលើរុក្ខជាតិឱសថជាមួយនឹងជីវបច្ចេកវិទ្យាជាក់ស្តែង។
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី ១២ ខែធ្នូ ឆ្នាំ ២០២៥