ការកំណត់អត្តសញ្ញាណទូទាំងហ្សែន និងការវិភាគការបញ្ចេញមតិនៃកត្តាបទប្បញ្ញត្តិកំណើនស្ពៃក្តោបក្រោមលក្ខខណ្ឌគ្រោះរាំងស្ងួត

ការចែកចាយទឹកភ្លៀងតាមរដូវនៅក្នុងខេត្ត Guizhou គឺមិនស្មើគ្នាទេ ដោយមានទឹកភ្លៀងច្រើនជាងនៅនិទាឃរដូវ និងរដូវក្តៅ ប៉ុន្តែសំណាបរ៉េបស៊ីដងាយនឹងទទួលរងនូវភាពតានតឹងគ្រោះរាំងស្ងួតនៅរដូវស្លឹកឈើជ្រុះ និងរដូវរងា ដែលប៉ះពាល់យ៉ាងធ្ងន់ធ្ងរដល់ទិន្នផល។ ស្ពៃខ្មៅគឺជាដំណាំប្រេងពិសេសមួយដែលដាំដុះជាចម្បងនៅក្នុងខេត្ត Guizhou។ វាមានភាពធន់នឹងគ្រោះរាំងស្ងួតខ្លាំង ហើយអាចដាំដុះនៅតំបន់ភ្នំ។ វាជាធនធានដ៏សម្បូរបែបនៃហ្សែនធន់នឹងគ្រោះរាំងស្ងួត។ ការរកឃើញហ្សែនធន់នឹងគ្រោះរាំងស្ងួតគឺមានសារៈសំខាន់ខ្លាំងណាស់សម្រាប់ការកែលម្អពូជស្ពៃខ្មៅ និងការច្នៃប្រឌិតថ្មីនៅក្នុងធនធានជីវសាស្ត្រ។ គ្រួសារ GRF ដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការលូតលាស់ និងការអភិវឌ្ឍរបស់រុក្ខជាតិ និងការឆ្លើយតបទៅនឹងភាពតានតឹងគ្រោះរាំងស្ងួត។ បច្ចុប្បន្ននេះ ហ្សែន GRF ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុង Arabidopsis 2 អង្ករ (Oryza sativa) 12 ស្ពៃខ្មៅ 13 កប្បាស (Gossypium hirsutum) 14 ស្រូវសាលី (Triticum). aestivum)15 មីលគុជ (Setaria italica)16 និង Brassica17 ប៉ុន្តែមិនមានរបាយការណ៍ណាមួយអំពីហ្សែន GRF ដែលត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងស្ពៃខ្មៅនោះទេ។ នៅក្នុងការសិក្សានេះ ហ្សែនគ្រួសារ GRF នៃស្ពៃខ្មៅត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅកម្រិតទូទាំងហ្សែន ហើយលក្ខណៈរូបវន្ត និងគីមីរបស់វា ទំនាក់ទំនងវិវត្តន៍ ភាពដូចគ្នា លំនាំអភិរក្ស រចនាសម្ព័ន្ធហ្សែន ការចម្លងហ្សែន ធាតុ cis និងដំណាក់កាលសំណាប (ដំណាក់កាលស្លឹកបួន) ត្រូវបានវិភាគ។ គំរូនៃការបញ្ចេញមតិក្រោមភាពតានតឹងគ្រោះរាំងស្ងួតត្រូវបានវិភាគយ៉ាងទូលំទូលាយ ដើម្បីផ្តល់មូលដ្ឋានវិទ្យាសាស្ត្រសម្រាប់ការសិក្សាបន្ថែមលើមុខងារដែលអាចកើតមាននៃហ្សែន BjGRF ក្នុងការឆ្លើយតបនឹងគ្រោះរាំងស្ងួត និងដើម្បីផ្តល់ហ្សែនបេក្ខជនសម្រាប់ការបង្កាត់ពូជស្ពៃខ្មៅដែលធន់នឹងគ្រោះរាំងស្ងួត។
ហ្សែន BjGRF ចំនួនសាមសិបបួនត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅក្នុងហ្សែន Brassica juncea ដោយប្រើការស្វែងរក HMMER ពីរ ដែលទាំងអស់នេះមានដែន QLQ និង WRC។ លំដាប់ CDS នៃហ្សែន BjGRF ដែលបានកំណត់អត្តសញ្ញាណត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងតារាងបន្ថែម S1។ BjGRF01–BjGRF34 ត្រូវបានដាក់ឈ្មោះដោយផ្អែកលើទីតាំងរបស់វានៅលើក្រូម៉ូសូម។ លក្ខណៈសម្បត្តិរូបវិទ្យា-គីមីនៃគ្រួសារនេះបង្ហាញថាប្រវែងអាស៊ីតអាមីណូមានភាពប្រែប្រួលខ្ពស់ ចាប់ពី 261 aa (BjGRF19) ដល់ 905 aa (BjGRF28)។ ចំណុចអ៊ីសូអេឡិចត្រិចនៃ BjGRF មានចាប់ពី 6.19 (BjGRF02) ដល់ 9.35 (BjGRF03) ជាមួយនឹងមធ្យមភាគ 8.33 ហើយ 88.24% នៃ BjGRF គឺជាប្រូតេអ៊ីនមូលដ្ឋាន។ ជួរទម្ងន់ម៉ូលេគុលដែលបានព្យាករណ៍របស់ BjGRF គឺចាប់ពី 29.82 kDa (BjGRF19) ដល់ 102.90 kDa (BjGRF28); សន្ទស្សន៍អស្ថិរភាពនៃប្រូតេអ៊ីន BjGRF មានចាប់ពី 51.13 (BjGRF08) ដល់ 78.24 (BjGRF19) ទាំងអស់គឺធំជាង 40 ដែលបង្ហាញថាសន្ទស្សន៍អាស៊ីតខ្លាញ់មានចាប់ពី 43.65 (BjGRF01) ដល់ 78.78 (BjGRF22) កម្រិត hydrophilicity ជាមធ្យម (GRAVY) មានចាប់ពី -1.07 (BjGRF31) ដល់ -0.45 (BjGRF22) ប្រូតេអ៊ីន BjGRF hydrophilic ទាំងអស់មានតម្លៃ GRAVY អវិជ្ជមាន ដែលអាចបណ្តាលមកពីកង្វះ hydrophobicity ដែលបណ្តាលមកពីសំណល់។ ការព្យាករណ៍ទីតាំងរងកោសិកាបានបង្ហាញថាប្រូតេអ៊ីនដែលបានអ៊ិនកូដ BjGRF ចំនួន 31 អាចត្រូវបានធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនៅក្នុងស្នូល BjGRF04 អាចត្រូវបានធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនៅក្នុង peroxisomes BjGRF25 អាចត្រូវបានធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនៅក្នុងស៊ីតូប្លាស្ម និង BjGRF28 អាចត្រូវបានធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនៅក្នុងក្លរ៉ូផ្លាស (តារាងទី 1) ដែលបង្ហាញថា BjGRFs អាចត្រូវបានធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនៅក្នុងស្នូល និងដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ជាកត្តានិយតកម្មចម្លង។
ការវិភាគពង្សាវតារនៃគ្រួសារ GRF នៅក្នុងប្រភេទសត្វផ្សេងៗគ្នាអាចជួយសិក្សាពីមុខងារហ្សែន។ ដូច្នេះ លំដាប់អាស៊ីតអាមីណូពេញលេញនៃស្រូវសាលីរ៉ាបស៊ីដចំនួន 35 ស្ពៃក្តោប 16 អង្ករ 12 មីលឡេត 10 និង Arabidopsis GRFs ចំនួន 9 ត្រូវបានទាញយក ហើយដើមឈើពង្សាវតារត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយផ្អែកលើហ្សែន BjGRF ចំនួន 34 ដែលបានកំណត់អត្តសញ្ញាណ (រូបភាពទី 1)។ អនុគ្រួសារទាំងបីមានចំនួនសមាជិកខុសៗគ្នា។ TFs GRF ចំនួន 116 ត្រូវបានបែងចែកជាអនុគ្រួសារបីផ្សេងគ្នា (ក្រុម A~C) ដែលមាន 59 (50.86%), 34 (29.31%) និង 23 (19.83)% នៃ GRFs រៀងៗខ្លួន។ ក្នុងចំណោមនោះ សមាជិកគ្រួសារ BjGRF ចំនួន 34 ត្រូវបានខ្ចាត់ខ្ចាយពាសពេញអនុគ្រួសារចំនួន 3៖ សមាជិក 13 នាក់ក្នុងក្រុម A (38.24%) សមាជិក 12 នាក់ក្នុងក្រុម B (35.29%) និងសមាជិក 9 នាក់ក្នុងក្រុម C (26.47%)។ នៅក្នុងដំណើរការនៃការបង្កើតពហុប្លូអ៊ីឌីសាស្យុងស្ពៃខ្មៅ ចំនួនហ្សែន BjGRFs នៅក្នុងអនុគ្រួសារផ្សេងៗគ្នាគឺខុសគ្នា ហើយការពង្រីក និងការបាត់បង់ហ្សែនអាចបានកើតឡើង។ គួរកត់សម្គាល់ថា មិនមានការចែកចាយ GRFs ស្រូវ និងមីលីនៅក្នុងក្រុម C ទេ ខណៈពេលដែលមាន GRFs ស្រូវចំនួន 2 និង GRF មីលីចំនួន 1 នៅក្នុងក្រុម B ហើយ GRFs ស្រូវ និងមីលីភាគច្រើនត្រូវបានដាក់ជាក្រុមនៅក្នុងមែកតែមួយ ដែលបង្ហាញថា BjGRFs មានទំនាក់ទំនងយ៉ាងជិតស្និទ្ធទៅនឹងរុក្ខជាតិឌីកូត។ ក្នុងចំណោមនោះ ការសិក្សាស៊ីជម្រៅបំផុតលើមុខងារ GRF នៅក្នុង Arabidopsis thaliana ផ្តល់មូលដ្ឋានសម្រាប់ការសិក្សាមុខងាររបស់ BjGRFs។
ដើមឈើពង្សាវតារនៃស្ពៃក្តោប រួមមាន Brassica napus, Brassica napus, អង្ករ, មី និងសមាជិកនៃគ្រួសារ Arabidopsis thaliana GRF។
ការវិភាគហ្សែនដដែលៗនៅក្នុងគ្រួសារ GRF ស្ពៃខ្មៅ។ ខ្សែពណ៌ប្រផេះនៅផ្ទៃខាងក្រោយតំណាងឱ្យប្លុកដែលធ្វើសមកាលកម្មនៅក្នុងហ្សែនស្ពៃខ្មៅ ខ្សែពណ៌ក្រហមតំណាងឱ្យការដដែលៗជាពីរផ្នែកនៃហ្សែន BjGRF;
ការបញ្ចេញហ្សែន BjGRF ក្រោមភាពតានតឹងគ្រោះរាំងស្ងួតនៅដំណាក់កាលស្លឹកទីបួន។ ទិន្នន័យ qRT-PCR ត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងតារាងបន្ថែម S5។ ភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងទិន្នន័យត្រូវបានចង្អុលបង្ហាញដោយអក្សរតូច។
ដោយសារអាកាសធាតុពិភពលោកបន្តផ្លាស់ប្តូរ ការសិក្សាពីរបៀបដែលដំណាំទប់ទល់នឹងភាពតានតឹងដោយសារគ្រោះរាំងស្ងួត និងការកែលម្អយន្តការអត់ធ្មត់របស់វាបានក្លាយជាប្រធានបទស្រាវជ្រាវដ៏ក្តៅគគុក18។ បន្ទាប់ពីគ្រោះរាំងស្ងួត រចនាសម្ព័ន្ធរូបវិទ្យា ការបញ្ចេញហ្សែន និងដំណើរការមេតាបូលីសរបស់រុក្ខជាតិនឹងផ្លាស់ប្តូរ ដែលអាចនាំឱ្យមានការបញ្ឈប់រស្មីសំយោគ និងការរំខានដល់មេតាបូលីស ដែលប៉ះពាល់ដល់ទិន្នផល និងគុណភាពនៃដំណាំ19,20,21។ នៅពេលដែលរុក្ខជាតិដឹងពីសញ្ញាគ្រោះរាំងស្ងួត ពួកវាបង្កើតអ្នកនាំសារទីពីរដូចជា Ca2+ និង phosphatidylinositol បង្កើនកំហាប់អ៊ីយ៉ុងកាល់ស្យូមក្នុងកោសិកា និងធ្វើឱ្យបណ្តាញនិយតកម្មនៃផ្លូវផូស្វ័រប្រូតេអ៊ីនសកម្ម22,23។ ប្រូតេអ៊ីនគោលដៅចុងក្រោយត្រូវបានចូលរួមដោយផ្ទាល់នៅក្នុងការការពារកោសិកា ឬគ្រប់គ្រងការបញ្ចេញហ្សែនស្ត្រេសដែលពាក់ព័ន្ធតាមរយៈ TFs ដែលបង្កើនភាពធន់នឹងរុក្ខជាតិចំពោះភាពតានតឹង24,25។ ដូច្នេះ TFs ដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងភាពតានតឹងដោយសារគ្រោះរាំងស្ងួត។ យោងតាមលំដាប់ និងលក្ខណៈសម្បត្តិភ្ជាប់ DNA នៃ TFs ដែលឆ្លើយតបទៅនឹងភាពតានតឹងដោយសារគ្រោះរាំងស្ងួត TFs អាចបែងចែកជាក្រុមគ្រួសារផ្សេងៗគ្នា ដូចជា GRF, ERF, MYB, WRKY និងក្រុមគ្រួសារផ្សេងទៀត26។
ក្រុមគ្រួសារហ្សែន GRF គឺជាប្រភេទនៃ TF ជាក់លាក់របស់រុក្ខជាតិ ដែលដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់នៅក្នុងទិដ្ឋភាពផ្សេងៗដូចជាការលូតលាស់ ការអភិវឌ្ឍ ការបញ្ជូនសញ្ញា និងការឆ្លើយតបការពាររុក្ខជាតិ27។ ចាប់តាំងពីហ្សែន GRF ដំបូងត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅក្នុង O. sativa28 ហ្សែន GRF កាន់តែច្រើនឡើងៗត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅក្នុងប្រភេទសត្វជាច្រើន និងបង្ហាញថាប៉ះពាល់ដល់ការលូតលាស់ ការអភិវឌ្ឍ និងការឆ្លើយតបស្ត្រេសរបស់រុក្ខជាតិ8, 29, 30, 31, 32។ ជាមួយនឹងការបោះពុម្ពផ្សាយលំដាប់ហ្សែន Brassica juncea ការកំណត់អត្តសញ្ញាណក្រុមគ្រួសារហ្សែន BjGRF បានក្លាយជាអាចធ្វើទៅបាន33។ នៅក្នុងការសិក្សានេះ ហ្សែន BjGRF ចំនួន 34 ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅក្នុងហ្សែនស្ពៃក្តោបទាំងមូល និងដាក់ឈ្មោះថា BjGRF01–BjGRF34 ដោយផ្អែកលើទីតាំងក្រូម៉ូសូមរបស់វា។ ពួកវាទាំងអស់មានដែន QLQ និង WRC ដែលមានការអភិរក្សខ្ពស់។ ការវិភាគលក្ខណៈសម្បត្តិរូបវិទ្យា-គីមីបានបង្ហាញថា ភាពខុសគ្នានៃចំនួនអាស៊ីតអាមីណូ និងទម្ងន់ម៉ូលេគុលនៃប្រូតេអ៊ីន BjGRF (លើកលែងតែ BjGRF28) គឺមិនសំខាន់ទេ ដែលបង្ហាញថាសមាជិកគ្រួសារ BjGRF អាចមានមុខងារស្រដៀងគ្នា។ ការវិភាគរចនាសម្ព័ន្ធហ្សែនបានបង្ហាញថា 64.7% នៃហ្សែន BjGRF មានផ្ទុកអ៊ិចសុងចំនួន 4 ដែលបង្ហាញថារចនាសម្ព័ន្ធហ្សែន BjGRF ត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងដំណាក់កាលវិវត្តន៍ ប៉ុន្តែចំនួនអ៊ិចសុងនៅក្នុងហ្សែន BjGRF10, BjGRF16, BjGRP28 និង BjGRF29 គឺធំជាង។ ការសិក្សាបានបង្ហាញថា ការបន្ថែម ឬលុបអ៊ិចសុង ឬអ៊ីនត្រុងអាចនាំឱ្យមានភាពខុសគ្នានៃរចនាសម្ព័ន្ធ និងមុខងារហ្សែន ដោយហេតុនេះបង្កើតហ្សែនថ្មី34,35,36។ ដូច្នេះ យើងសន្និដ្ឋានថាអ៊ីនត្រុងរបស់ BjGRF បានបាត់បង់ក្នុងអំឡុងពេលវិវត្តន៍ ដែលអាចបណ្តាលឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរមុខងារហ្សែន។ ស្របនឹងការសិក្សាដែលមានស្រាប់ យើងក៏បានរកឃើញថាចំនួនអ៊ីនត្រុងត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការបញ្ចេញហ្សែន។ នៅពេលដែលចំនួនអ៊ីនត្រុងនៅក្នុងហ្សែនមានទំហំធំ ហ្សែនអាចឆ្លើយតបយ៉ាងឆាប់រហ័សចំពោះកត្តាមិនអំណោយផលផ្សេងៗ។
ការចម្លងហ្សែនគឺជាកត្តាចម្បងមួយនៅក្នុងការវិវត្តន៍ហ្សែន និងហ្សែន37។ ការសិក្សាពាក់ព័ន្ធបានបង្ហាញថា ការចម្លងហ្សែនមិនត្រឹមតែបង្កើនចំនួនហ្សែន GRF ប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែវាថែមទាំងបម្រើជាមធ្យោបាយនៃការបង្កើតហ្សែនថ្មីដើម្បីជួយរុក្ខជាតិឱ្យសម្របខ្លួនទៅនឹងលក្ខខណ្ឌបរិស្ថានមិនល្អផ្សេងៗ38។ គូហ្សែនស្ទួនសរុបចំនួន 48 ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងការសិក្សានេះ ដែលទាំងអស់នេះគឺជាការចម្លងតាមផ្នែក ដែលបង្ហាញថា ការចម្លងតាមផ្នែកគឺជាយន្តការចម្បងសម្រាប់បង្កើនចំនួនហ្សែននៅក្នុងគ្រួសារនេះ។ វាត្រូវបានរាយការណ៍នៅក្នុងអក្សរសិល្ប៍ថា ការចម្លងតាមផ្នែកអាចជំរុញការពង្រីកសមាជិកគ្រួសារហ្សែន GRF នៅក្នុង Arabidopsis និង strawberry ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព ហើយមិនមានការចម្លងតាមផ្នែកនៃគ្រួសារហ្សែននេះត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងប្រភេទសត្វណាមួយឡើយ27,39។ លទ្ធផលនៃការសិក្សានេះគឺស្របនឹងការសិក្សាដែលមានស្រាប់លើគ្រួសារ Arabidopsis thaliana និង strawberry ដែលបង្ហាញថាគ្រួសារ GRF អាចបង្កើនចំនួនហ្សែន និងបង្កើតហ្សែនថ្មីតាមរយៈការចម្លងតាមផ្នែកនៅក្នុងរុក្ខជាតិផ្សេងៗគ្នា។
នៅក្នុងការសិក្សានេះ ហ្សែន BjGRF សរុបចំនួន 34 ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅក្នុងស្ពៃខ្មៅ ដែលត្រូវបានបែងចែកជា 3 អនុវង្ស។ ហ្សែនទាំងនេះបង្ហាញពីលំនាំអភិរក្សស្រដៀងគ្នា និងរចនាសម្ព័ន្ធហ្សែន។ ការវិភាគ Collinearity បានបង្ហាញពីការចម្លងផ្នែកចំនួន 48 គូនៅក្នុងស្ពៃខ្មៅ។ តំបន់ផ្សព្វផ្សាយ BjGRF មានធាតុ cis ដែលជាប់ទាក់ទងនឹងការឆ្លើយតបពន្លឺ ការឆ្លើយតបអរម៉ូន ការឆ្លើយតបស្ត្រេសបរិស្ថាន និងការលូតលាស់ និងការអភិវឌ្ឍ។ ការបញ្ចេញមតិនៃហ្សែន BjGRF ចំនួន 34 ត្រូវបានរកឃើញនៅដំណាក់កាលសំណាបស្ពៃខ្មៅ (ឫស ដើម ស្លឹក) និងគំរូការបញ្ចេញមតិនៃហ្សែន BjGRF ចំនួន 10 ក្រោមលក្ខខណ្ឌគ្រោះរាំងស្ងួត។ វាត្រូវបានគេរកឃើញថាគំរូការបញ្ចេញមតិនៃហ្សែន BjGRF ក្រោមភាពតានតឹងគ្រោះរាំងស្ងួតគឺស្រដៀងគ្នា និងអាចស្រដៀងគ្នា។ ការចូលរួមក្នុងបទប្បញ្ញត្តិបង្ខំគ្រោះរាំងស្ងួត។ ហ្សែន BjGRF03 និង BjGRF32 អាចដើរតួនាទីនិយតកម្មវិជ្ជមាននៅក្នុងភាពតានតឹងគ្រោះរាំងស្ងួត ខណៈពេលដែល BjGRF06 និង BjGRF23 ដើរតួនាទីក្នុងភាពតានតឹងគ្រោះរាំងស្ងួតជាហ្សែនគោលដៅ miR396។ ជារួម ការសិក្សារបស់យើងផ្តល់នូវមូលដ្ឋានជីវសាស្រ្តសម្រាប់ការរកឃើញនាពេលអនាគតនៃមុខងារហ្សែន BjGRF នៅក្នុងរុក្ខជាតិ Brassicaceae។
គ្រាប់ស្ពៃក្តោបដែលប្រើក្នុងការពិសោធន៍នេះត្រូវបានផ្តល់ដោយវិទ្យាស្ថានស្រាវជ្រាវគ្រាប់ពូជប្រេង Guizhou នៃបណ្ឌិត្យសភាវិទ្យាសាស្ត្រកសិកម្ម Guizhou។ ជ្រើសរើសគ្រាប់ពូជទាំងមូល ហើយដាំវានៅក្នុងដី (ស្រទាប់ខាងក្រោម៖ ដី = 3:1) ហើយប្រមូលឫស ដើម និងស្លឹកបន្ទាប់ពីដំណាក់កាលស្លឹកបួន។ រុក្ខជាតិត្រូវបានព្យាបាលដោយ PEG 6000 20% ដើម្បីធ្វើត្រាប់តាមគ្រោះរាំងស្ងួត ហើយស្លឹកត្រូវបានប្រមូលបន្ទាប់ពី 0, 3, 6, 12 និង 24 ម៉ោង។ គំរូរុក្ខជាតិទាំងអស់ត្រូវបានកកភ្លាមៗក្នុងអាសូតរាវ ហើយបន្ទាប់មករក្សាទុកក្នុងទូរទឹកកកដែលមានសីតុណ្ហភាព -80°C សម្រាប់ការធ្វើតេស្តបន្ទាប់។
ទិន្នន័យទាំងអស់ដែលទទួលបាន ឬវិភាគក្នុងអំឡុងពេលសិក្សានេះត្រូវបានរួមបញ្ចូលនៅក្នុងអត្ថបទដែលបានបោះពុម្ពផ្សាយ និងឯកសារព័ត៌មានបន្ថែម។