សម្ភារៈរុក្ខជាតិ និងភ្នាក់ងារបង្កជំងឺ
ចំនួនប្រជាជនផែនទីសមាគម sorghum ដែលគេស្គាល់ថាជាចំនួនប្រជាជនបំលែង sorghum (SCP) ត្រូវបានផ្តល់ដោយលោកវេជ្ជបណ្ឌិត Pat Brown នៅសាកលវិទ្យាល័យ Illinois (ឥឡូវនៅ UC Davis)។ វាត្រូវបានពិពណ៌នាពីមុន ហើយវាគឺជាការប្រមូលផ្តុំនៃខ្សែចម្រុះដែលបានបំលែងទៅជាភាពមិនងាយនឹងពន្លឺ និងកម្ពស់តូចជាងមុន ដើម្បីសម្រួលដល់ការលូតលាស់ និងការអភិវឌ្ឍរបស់រុក្ខជាតិនៅក្នុងបរិស្ថានសហរដ្ឋអាមេរិក។ ខ្សែចំនួន 510 ពីចំនួនប្រជាជននេះត្រូវបានប្រើប្រាស់ក្នុងការសិក្សានេះ ទោះបីជាដោយសារតែដំណុះមិនល្អ និងបញ្ហាគ្រប់គ្រងគុណភាពផ្សេងទៀត មិនមែនខ្សែទាំងអស់ត្រូវបានប្រើប្រាស់ក្នុងការវិភាគលក្ខណៈទាំងបីនោះទេ។ នៅទីបំផុត ទិន្នន័យពីខ្សែចំនួន 345 ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការវិភាគនៃការឆ្លើយតប chitin ខ្សែចំនួន 472 សម្រាប់ការឆ្លើយតប flg22 និង 456 សម្រាប់ភាពធន់នឹង TLS។ខ. ឃុកគីពូជ LSLP18 ត្រូវបានទទួលពីលោកវេជ្ជបណ្ឌិត Burt Bluhm នៅសាកលវិទ្យាល័យ Arkansas។
ការវាស់វែងការឆ្លើយតប MAMP
MAMPs ពីរផ្សេងគ្នាត្រូវបានប្រើប្រាស់នៅក្នុងការសិក្សានេះ flg22 (កាតាឡុក Genscript# RP19986) និង chitin។ ដើម Sorghum ត្រូវបានដាំដុះជាស្រទាប់ៗដែលដាក់នៅលើដីរាបស្មើដែលពោរពេញទៅដោយដី (ល្បាយដាំដុះ Sunshine Redi-Earth Pro 33%) នៅក្នុងផ្ទះកញ្ចក់។ រុក្ខជាតិត្រូវបានស្រោចទឹកមួយថ្ងៃមុនពេលប្រមូលសំណាក ដើម្បីជៀសវាងសំណើមស្លឹកបន្ថែមនៅថ្ងៃប្រមូល។
ពូជស្រូវទាំងនោះត្រូវបានចៃដោយចៃដន្យ ហើយដោយសារហេតុផលភស្តុភារ ត្រូវបានដាំជាបាច់ៗចំនួន 60 ពូជ។ សម្រាប់ពូជស្រូវនីមួយៗ ផើងចំនួនបីត្រូវបានដាំជាមួយគ្រាប់ពូជពីរក្នុងមួយពូជ។ ពូជស្រូវជាបន្តបន្ទាប់ត្រូវបានដាំភ្លាមៗនៅពេលដែលពូជស្រូវមុនត្រូវបានដំណើរការរហូតដល់ចំនួនប្រជាជនទាំងមូលត្រូវបានវាយតម្លៃ។ ការសាកល្បងពិសោធន៍ពីរត្រូវបានធ្វើឡើងសម្រាប់ MAMP ទាំងពីរជាមួយនឹងហ្សែនដែលត្រូវបានចៃឡើងវិញនៅក្នុងការសាកល្បងនីមួយៗទាំងពីរ។
ការវិភាគ ROS ត្រូវបានអនុវត្តដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន។ ជាសង្ខេប សម្រាប់ខ្សែនីមួយៗ គ្រាប់ពូជចំនួនប្រាំមួយត្រូវបានដាំក្នុងផើងចំនួន 3 ផ្សេងគ្នា។ ពីសំណាបលទ្ធផល បីត្រូវបានជ្រើសរើសដោយផ្អែកលើឯកសណ្ឋាន។ សំណាបដែលមើលទៅមិនធម្មតា ឬខ្ពស់ជាង ឬខ្លីជាងភាគច្រើនគួរឱ្យកត់សម្គាល់មិនត្រូវបានប្រើទេ។ ឌីសស្លឹកចំនួនបួនដែលមានអង្កត់ផ្ចិត 3 ម.ម ត្រូវបានកាត់ចេញពីផ្នែកធំទូលាយបំផុតនៃស្លឹកទី 4 នៃដើម sorghum អាយុ 15 ថ្ងៃចំនួនបីផ្សេងគ្នា។ ឌីសមួយសម្រាប់ស្លឹកនីមួយៗពីរុក្ខជាតិពីរ និងឌីសពីរពីរុក្ខជាតិមួយ ដោយឌីសទីពីរក្លាយជាការគ្រប់គ្រងទឹក (សូមមើលខាងក្រោម)។ ឌីសទាំងនោះត្រូវបានអណ្តែតដោយឡែកពីគ្នានៅលើ H20 50 µl ក្នុងចាន 96 រន្ធពណ៌ខ្មៅ បិទជិតដោយផ្សាភ្ជាប់អាលុយមីញ៉ូមដើម្បីជៀសវាងការប៉ះពាល់នឹងពន្លឺ ហើយរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ពេញមួយយប់។ នៅព្រឹកបន្ទាប់ ដំណោះស្រាយប្រតិកម្មមួយត្រូវបានផលិតឡើងដោយប្រើសារធាតុរាវ chemiluminescent probe L-012 (Wako, កាតាឡុកលេខ 120-04891) សារធាតុ horseradish peroxidase ចំនួន 2 មីលីក្រាម/មីលីលីត្រ (ប្រភេទ VI-A, Sigma-Aldrich, កាតាឡុកលេខ P6782) និងសារធាតុ Chitin ចំនួន 100 មីលីក្រាម/មីលីលីត្រ ឬ Flg22 ចំនួន 2 μM។ ដំណោះស្រាយប្រតិកម្មចំនួន 50 µl ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងអណ្តូងបីក្នុងចំណោមអណ្តូងទាំងបួន។ អណ្តូងទីបួនគឺជាការគ្រប់គ្រងសាកល្បង ដែលដំណោះស្រាយប្រតិកម្មដែលមិនរាប់បញ្ចូល MAMP ត្រូវបានបន្ថែម។ អណ្តូងទទេចំនួនបួនដែលមានតែទឹកក៏ត្រូវបានរួមបញ្ចូលនៅក្នុងចាននីមួយៗផងដែរ។
បន្ទាប់ពីបន្ថែមដំណោះស្រាយប្រតិកម្មរួច ពន្លឺត្រូវបានវាស់ដោយប្រើឧបករណ៍អានមីក្រូផ្លាត SynergyTM 2 multi-detection microplate (BioTek) រៀងរាល់ 2 នាទីម្តងរយៈពេល 1 ម៉ោង។ ឧបករណ៍អានផ្លាតធ្វើការវាស់ពន្លឺរៀងរាល់ 2 នាទីម្តងក្នុងអំឡុងពេល 1 ម៉ោងនេះ។ ផលបូកនៃការអានទាំង 31 ត្រូវបានគណនាដើម្បីផ្តល់តម្លៃសម្រាប់អណ្តូងនីមួយៗ។ តម្លៃប៉ាន់ស្មានសម្រាប់ការឆ្លើយតប MAMP សម្រាប់ហ្សែននីមួយៗត្រូវបានគណនាជា (តម្លៃពន្លឺជាមធ្យមនៃអណ្តូងពិសោធន៍ទាំងបី - តម្លៃអណ្តូងសាកល្បង) - ដកតម្លៃអណ្តូងទទេជាមធ្យម។ តម្លៃអណ្តូងទទេគឺជិតនឹងសូន្យជាប់លាប់។
ឌីសស្លឹកឈើនីកូទីយ៉ាណា ប៊ែនថាមីណា, ខ្សែស្រូវសាលីដែលមានការឆ្លើយតបខ្ពស់មួយ (SC0003) និងខ្សែស្រូវសាលីដែលមានការឆ្លើយតបទាបមួយ (PI 6069) ក៏ត្រូវបានរួមបញ្ចូលជាការគ្រប់គ្រងនៅក្នុងចាន 96 អណ្តូងនីមួយៗសម្រាប់គោលបំណងត្រួតពិនិត្យគុណភាពផងដែរ។
ខ. ឃុកគីការរៀបចំ និងការចាក់វ៉ាក់សាំង
ខ. ឃុកគីវ៉ាក់សាំងត្រូវបានរៀបចំដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន។ ជាសង្ខេប គ្រាប់ស្រូវសាលីត្រូវបានត្រាំក្នុងទឹករយៈពេលបីថ្ងៃ លាងសម្អាត ដាក់ចូលក្នុងដបរាងសាជី 1 លីត្រ ហើយសម្លាប់មេរោគរយៈពេលមួយម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 15psi និង 121°C។ បន្ទាប់មក គ្រាប់ត្រូវបានចាក់មេរោគប្រហែល 5 មីលីលីត្រនៃផ្សិតដែលរលាយពីវប្បធម៌ស្រស់នៃខ. ឃុកគីLSLP18 ត្រូវបានញែកចេញ ហើយទុកចោលរយៈពេល 2 សប្តាហ៍នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ ដោយអង្រួនដបរៀងរាល់ 3 ថ្ងៃម្តង។ បន្ទាប់ពី 2 សប្តាហ៍ គ្រាប់ស្រូវសាលីដែលមានផ្សិតត្រូវបានសម្ងួតដោយខ្យល់ ហើយបន្ទាប់មករក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 4°C រហូតដល់ការចាក់វ៉ាក់សាំងនៅក្នុងវាល។ ការចាក់វ៉ាក់សាំងដូចគ្នានេះត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការសាកល្បងទាំងមូល ហើយធ្វើឱ្យស្រស់ជារៀងរាល់ឆ្នាំ។ សម្រាប់ការចាក់វ៉ាក់សាំង គ្រាប់ស្រូវសាលីដែលមានមេរោគចំនួន 6-10 គ្រាប់ត្រូវបានដាក់ចូលទៅក្នុងរង្វង់នៃដើមស្រូវសាលីអាយុ 4-5 សប្តាហ៍។ ស្ព័រដែលផលិតចេញពីផ្សិតទាំងនេះបានបង្កឱ្យមានការឆ្លងមេរោគនៅក្នុងដើមស្រូវសាលីវ័យក្មេងក្នុងរយៈពេលមួយសប្តាហ៍។
ការរៀបចំគ្រាប់ពូជ
មុនពេលដាំនៅក្នុងវាលស្រែ គ្រាប់ពូជស្រូវសាលីត្រូវបានព្យាបាលដោយថ្នាំសម្លាប់ផ្សិត ថ្នាំសម្លាប់សត្វល្អិត និងល្បាយថ្នាំសម្លាប់សត្វល្អិត Safer ដែលមានប្រហែល 1% នៃថ្នាំសម្លាប់ផ្សិត Spirato 480 FS សារធាតុសម្លាប់ផ្សិត Sebring 480 FS 4% សារធាតុសម្លាប់ផ្សិត Sorpro 940 ES 3%។ បន្ទាប់មក គ្រាប់ពូជត្រូវបានសម្ងួតដោយខ្យល់រយៈពេល 3 ថ្ងៃ ដែលផ្តល់នូវថ្នាំកូតស្តើងនៃល្បាយនេះជុំវិញគ្រាប់ពូជ។ ថ្នាំសម្លាប់សត្វល្អិត Safer អនុញ្ញាតឱ្យប្រើថ្នាំសម្លាប់ស្មៅ Dual Magnum ជាការព្យាបាលមុនពេលដុះពន្លក។
ការវាយតម្លៃភាពធន់នឹងចំណុចស្លឹកគោលដៅ
SCP ត្រូវបានដាំនៅស្ថានីយ៍ស្រាវជ្រាវដំណាំកណ្តាលក្នុងទីក្រុង Clayton រដ្ឋ North Carolina នៅថ្ងៃទី 14-15 ខែមិថុនា ឆ្នាំ 2017 និងថ្ងៃទី 20 ខែមិថុនា ឆ្នាំ 2018 ក្នុងការរចនាប្លុកពេញលេញដោយចៃដន្យ ជាមួយនឹងការចម្លងពិសោធន៍ពីរក្នុងករណីនីមួយៗ។ ការពិសោធន៍ត្រូវបានដាំជាជួរតែមួយ 1.8 ម៉ែត្រ ដែលមានទទឹងជួរ 0.9 ម៉ែត្រ ដោយប្រើគ្រាប់ពូជចំនួន 10 ក្នុងមួយឡូត៍។ ជួរព្រំដែនពីរត្រូវបានដាំនៅជុំវិញបរិវេណនៃការពិសោធន៍នីមួយៗ ដើម្បីការពារផលប៉ះពាល់គែម។ ការពិសោធន៍ត្រូវបានចាក់វ៉ាក់សាំងនៅថ្ងៃទី 20 ខែកក្កដា ឆ្នាំ 2017 និងថ្ងៃទី 20 ខែកក្កដា ឆ្នាំ 2018 ដែលនៅចំណុចនោះដើមស្រូវសាលីស្ថិតនៅដំណាក់កាលលូតលាស់ទី 3។ ការវាយតម្លៃត្រូវបានធ្វើឡើងលើមាត្រដ្ឋានមួយដល់ប្រាំបួន ដែលរុក្ខជាតិដែលមិនបង្ហាញសញ្ញានៃជំងឺត្រូវបានផ្តល់ពិន្ទុជាប្រាំបួន ហើយរុក្ខជាតិដែលងាប់ទាំងស្រុងត្រូវបានផ្តល់ពិន្ទុជាមួយ។ ការវាយតម្លៃពីរត្រូវបានធ្វើឡើងនៅឆ្នាំ 2017 និងការអានចំនួនបួននៅឆ្នាំ 2018 ដោយចាប់ផ្តើមពីរសប្តាហ៍បន្ទាប់ពីការចាក់វ៉ាក់សាំងជារៀងរាល់ឆ្នាំ។ sAUDPC (តំបន់ស្តង់ដារក្រោមខ្សែកោងវឌ្ឍនភាពនៃជំងឺ) ត្រូវបានគណនាដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន។
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ មេសា-០១-២០២១